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本试剂盒使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌及昆虫细胞表达的重组蛋白提取。提取过程中不需进行超声破碎，有效避免了外源蛋白的污染。本制品可应用于从细菌裂解液中提取可溶性蛋白。细菌蛋白抽提试剂盒在抽提试剂的基础上添加了溶菌酶、DNaseⅠ和蛋白酶抑制剂混合物，可提高蛋白提取效率并减轻因DNA引起的粘稠现象，有效避免蛋白降解。所提取的蛋白保持了生物学活性，可进行IP、Westernblot、蛋白纯化等下游操作。

• 本制品适用于从新鲜或冻存细菌和昆虫细胞中提取蛋白。
  
• 本制品采用Tris缓冲系统，蛋白提取后的纯化操作，请使用相同的缓冲系统。
  
• 使用本制品获得的蛋白裂解液，可用BCA或Bradford法进行蛋白定量。
  
• 对于特殊的菌株，如果抽提效果不理想，可在抽提蛋白前冰冻样品。
  
• 根据具体情况，可在本制品中加入蛋白酶抑制剂、盐、螯合剂、还原剂等。

• 昆虫细胞蛋白提取
  
  • 低速离心收集细胞。每1mL Bacterial Protein Extraction Reagent中加入10μL Protease Inhibitor Cocktail即为1×工作液。
    
  • 称量细胞湿重，按10mL/g的量加入1×工作液。
    
  • 重悬后，冰上孵育20分钟（冰上放置时间应根据细胞类型不同进行调整）。
    
  • 15000×g离心15分钟，分离可溶性蛋白。
  
  
• 细菌可溶性蛋白提取
  
  • 5000×g离心10分钟，收集菌体。
    
  • 可选步骤：每1mL Bacterial Protein Extraction Reagent中加入1μL DNase I（1,000U/mL）、2μL Lysozyme（50mg/mL）和10μL Protease Inhibitor Cocktail，涡旋震荡混匀。
    
  • 按照每克菌体沉淀加入20mL Bacterial Protein Extraction Reagent的比例，向菌体沉淀中加入抽提液，充分涡旋或用移液器上下吹打直至菌体完全重悬。
    
  • 重悬后，室温孵育10～15分钟（放置时间应根据细胞类型不同进行调整）。
    
  • 15000×g离心5分钟。
    
  • 转移上清至新的离心管中（上清中即为可溶性蛋白），进行蛋白定量及下游实验。
    注意：如目的蛋白以包涵体形式存在，可使用包涵体蛋白溶解液进行溶解或优化表达条件增加可溶性蛋白的表达。